Pepstatin ist ein Pentapeptid, ein natürlich vorkommender Aspartylproteaseinhibitor, der die Asparaginprotease und Säureprotease verschiedener Mikroorganismen hemmen kann.Pepstatin wird hauptsächlich von Streptomyces-Arten abgesondert und von Streptomyces produziert.Es kann Pepsin, Pepsin D und das Angiotensin-freisetzende Enzym hemmen und hat therapeutische Wirkungen bei Magengeschwüren, renaler Hypertonie, Arthritis, Carrageen-Ödemen und anderen Krankheiten.
Pepstatin ist ein starker Inhibitor von Aspartylproteasen wie Pepsin, Cathepsin D und Renin.Dieses aus Actinomyceten isolierte natürliche Pentapeptid war viele Jahre lang der klassische Renin-Inhibitor in vitro. Pepstatin ist nicht spezifisch für Renin und in Wasser schlecht löslich.Strukturelle Derivate von Pepstatin erhöhten seine Löslichkeit und Spezifität für Renin um mehrere Größenordnungen. Pepstatin enthält die ungewöhnliche γ-Aminosäure Statin, die aufgrund der Strukturanalogie die beiden Aminosäuren an der spaltbaren Bindung des Proteinsubstrats ersetzen und die Substratspaltung blockieren kann zu einem Übergangszustand der Peptidbindungshydrolyse durch Aspartylproteasen.
Wenn Protein aus zerstörten Zellen extrahiert wird, können Proteasen freigesetzt werden, die schnell gehemmt werden müssen, um den Proteinabbau zu verhindern.Bei der Proteinextraktion müssen Proteaseinhibitoren zugesetzt werden, um eine Proteolyse zu verhindern.Unter Proteaseinhibitor versteht man im Allgemeinen eine Substanz, die an einige Gruppen im aktiven Zentrum von Proteasemolekülen bindet, sodass die Proteaseaktivität abnimmt oder sogar verschwindet, das Enzymprotein jedoch nicht denaturiert.Die Empfindlichkeit verschiedener Proteasen gegenüber unterschiedlichen Proteinen ist unterschiedlich, daher ist es notwendig, die Konzentration verschiedener Proteasen anzupassen.Da die Löslichkeit des Proteaseinhibitors in Flüssigkeit äußerst gering ist, sollte besonders darauf geachtet werden, dass der Proteaseinhibitor vollständig in den Puffer eingemischt wird, um die Ausfällung des Proteaseinhibitors zu reduzieren.Pepstantin A kann saure Proteasen wie Pepsin, Angiotensin, Kollagenase, Cathepsin D und Chymosin hemmen.
Pepstatin A ist ein Inhibitor von Cathepsin D und E.Nachdem HEK293-Zellen 24 Stunden lang mit unterschiedlichen Konzentrationen von Pepstatin A behandelt wurden, wurde die Expression von LC3Ⅱ und p62 nachgewiesen.Die Ergebnisse zeigten, dass Pepstatin A die Expression von LC3Ⅱ und P62 (P< 0,05) dosisabhängig.20 μg/ml Pepstatin A wurden zur Behandlung von HEK293 in verschiedenen Zeitintervallen verwendet, und die Auswirkungen verschiedener Zeitintervalle auf die Expression von LC3II und p62 wurden beobachtet.Die Ergebnisse zeigten, dass Pepstatin A die Expression von LC3II und p62 zeitabhängig hochregulieren konnte.
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